Grupo Español y Portugués de la ISFG
Grupo Español y Portugués de la ISFG
Estudio de colaboración de STRs de cromosoma X
 
En las XI Jornadas del GEP-ISFG, en Madrid, ha sido presentada una propuesta de realización de un trabajo de colaboración entre laboratorios del grupo con el objetivo de evaluar un multiplex para estudio de X-STRs. Este trabajo será coordinado por el grupo de cromosomas sexuales del GEP-ISFG en colaboración con la Unidad de Medicina Legal del Laboratorio de Genética Forense de la Universidad de Cantabria y con el Instituto de Medicina Legal de Santiago de Compostela.
 

Los laboratorios interesados en participar deben inscribirse enviando un-mail a Leonor Gusmao ([email protected]). Para participar en este trabajo, los laboratorios tendrán que pagar una inscripción de 50 euros para soportar gastos para la compra y envío de primers y muestras. Para información acerca de cómo realizar el pago por favor consulta la página (http://www.gep-isfg.org/ISFG/Castellano/Control_de_calidad/formas_pago.php) y, en caso de duda, contacta con el tesorero, Iñaki Yurrebaso ([email protected]).

 
Fecha limite para inscripción en el ejercicio: 15 de Noviembre de 2006

 

Se enviarán 2 muestras (manchas de sangre en papel FTA) y una alícuota de primers para la amplificación de los 10 STRs incluidos en el multiplex a todos los laboratorios inscritos.

Los resultados obtenidos para las 2 muestras enviadas, mediante la utilización del multiplex (cuyos protocolos se adjuntan al final de este documento), deben ser enviados por correo a Leonor Gusmão ([email protected]).

 
Fecha limite para envío de resultados: 31 de Enero de 2006
 
Protocolo de amplificación X-STR DECAPLEX
 
X-STRs: DXS8378, DXS9898, DXS7133, GATA31E08, GATA172D05, DXS7423, DXS6809, DXS7132, DXS9902, DXS6789

 

 

 

 

 

 

 

 
 
Tabla 1. Primers: secuencia y marcaje

 

Locus
Secuencia de los primer (5’-3’)
Ref.
DXS8378
6-FAM TTAGGCAACCCGGTGGTCC ACAAGAACGAAACTCCAACTC
[1]
DXS9898
6-FAM CGAGCACACCTACAAAAGCTG TAGGCTCACCTCACTGAGCA
New
DXS7133
6-FAM CACTTCCAAAAGGGGAAAAA ACTTGTACTTGGTGGGAGGAA
New
GATA31E08
6-FAM GCAAGGGGAGAAGGCTAGAA TCAGCTGACAGAGCACAGAGA
New
GATA172D05
VIC TAGTGGTGATGGTTGCACAG ATAATTGAAAGCCCGGATTC
[1]
DXS7423
VIC GTCTTCCTGTCATCTCCCAAC TAGCTTAGCGCCTGGCACATA
[1]
DXS6809
VIC TCCATCTTTCTCTGAACCTTCC TGCTTTAGGCTGATGTGAGG
New

 

DXS7132
NED TCCCCTCTCATCTATCTGACTG CACTCCTGGTGCCAAACTCT
New
DXS9902
NED CTGGGTGAAGAGAAGCAGGA GGCAATACACATTCATATCAGGA
New
DXS6789
NED CTTCATTATGTGCTGGGGTAAA ACCTCGTGATCATGTAAGTTGG
New

 

[1] Edelmann et al. Forensic Sci Int 129: 99-103 (2002)

 

Reactivos PCR:
- 10X Primer Mix (incluye todos los primers a una concentración de 2µM. En la Tabla 1 esta indicada la secuencia y marcaje de los primers)
- QIAGEN Multiplex PCR kit (http://www.qiagen.com)
 
 
PCR (Qiagen amplification kit)
 

 
Volumen por muestra

 

 
2x Qiagen Multiplex PCR Master Mix
5 µl
 
10x Primer mix
1 µl
 
H2O
3,5 µl
 
 
 
 
 
 

9,5 µl

+ 0.5 µl ADN (1 ng/µl)

10 µl volumen final

 

Condiciones cíclicas de la PCR

 

Desnaturalización inicial

95 ºC

15 min

 

94 ºC

30 sec

10 X

60 ºC

90 sec

 

72 ºC

60 sec

     
 

94 ºC

30 sec

20 X

58 ºC

90 sec

 

72 ºC

60 sec

     

Extensión final

60 ºC

60 min

 

Post PCR
 
Size standard LIZ500; Filtro G5
Size standard ROX500; Filtro D

Muestras de referencia:

Locus
9947A
9948
NA3657
Referencia
DXS8378
10-11
11
12
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43
DXS9898
12-15
13

 

Gomes et al. IJLM (enviado)
DXS7133
9-10
11
9
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43
GATA31E08
11
10

 

Shin et al. FSI 147 (2005) 35-41
GATA172D05
10
6
9
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43
DXS7423
14-15
14
13
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43
DXS6809
31-34
31
29
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43
DXS7132
12
13
12
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43
DXS9902
11
12
12
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43
DXS6789
21-22
20
23
Szibor et al. FSI 138 (2003) 37-43